银杏叶中黄酮类化合物的提取
实验三十五 银杏叶中黄酮类化合物的提取
一、实验目的
1．学习从银杏叶中提取黄酮类化合物的原理和方法。
2．初步掌握索氏提取器的基本操作技能。
二、基本原理
银杏叶是银杏科银杏属植物银杏的叶子。银杏叶提取物对于治疗心脑血管疾病、 神经系统 障碍、消除人体自由基等方面有显著疗效。以银杏叶的主要提取物为原料的药品、化妆品、 保健品早已见诸市场。我国银杏资源十分丰富，约占世界银杏资源的3／4以上，所以研究、开发以银杏叶为原料的产品是很有前途的。
银杏叶中化学成分很多，主要有黄酮类、萜 内酯类、聚戊烯醇类、酚类、生物碱和 多糖等药用成分。银杏叶中的黄酮类化合物，是由黄酮（Flavone）及其苷、双黄酮、 儿茶素三类组成，现已分离出约40种黄酮类化合物，其中黄酮及其苷28种，双黄酮6种，儿茶素4种。黄酮类分子结构如下：
提取银杏叶中黄酮类化合物的主要方法有：水蒸气蒸馏、有机溶剂萃取和超临界流体萃取法[1]。常用的有机溶剂有： 甲醇、 乙醇、 丙酮、 石油醚等。干燥和粉碎过的银杏叶通过索氏提取器提取后，蒸去溶剂可得棕黑色的银杏浸膏粗提物。粗提物经过萃取、沉淀法或柱分离精制后，可得精提取物，为黄褐色的粉末，其中黄酮类化合物含量为20%～26%。
根据索氏提取器（如图6-1所示）的大小，用滤纸做成大小相宜的套袋，将粉碎后的银杏叶称量，放入滤纸套袋中，放到索氏提取器中进行回流提取。加热后的溶剂沿管壁不断上升，萃取银杏叶中的黄酮类物质后，又流回烧瓶中，这样反复循环，黄酮类物质逐渐富集在烧瓶内。提取液再经浓缩，可得黄酮类物质。
三、仪器和 试剂
1．仪器
索氏提取器 500mL圆底烧瓶
球形冷凝管 500mL分液漏斗
100mL 锥形瓶 250mL锥形瓶
电加热套 离心机
蒸馏装置一套 色谱柱
旋转蒸发器
2．试剂
20%、60%、70%乙醇溶液 三氯甲烷
无水硫酸钠 2% 氢氧化钠溶液
2%盐酸溶液 聚酰胺树脂
银杏叶粉末
四、实验步骤
1．提取
如图6-1所示，称取干燥的、粉碎后的银杏叶粉末50g，装入索氏提取器的滤纸套袋中，在500mL圆底烧瓶内加入250mL 60%乙醇，用电加热套加热，连续提取3小时左右，等叶子颜色变浅，可停止加热。待在虹吸管内的冷凝液刚落下时，立即停止加热，用旋转蒸发器蒸去溶剂，即得棕黑色的银杏浸膏粗提物，称取质量，计算产率。
图6-1 索氏提取器
2．精制
可选用下述方法中任一种方法提纯。
（1）液-液萃取法。在500mL烧杯中，将银杏浸膏粗产物加250mL 去离子水，搅拌均匀。再将此溶液转移至分液漏斗中，分3次用60mL二氯甲烷萃取[2]。合并萃取液。用无水Na2SO4干燥。用旋转蒸发器蒸去二氯甲烷，蒸馏剩余物为黄酮类化合物的提取物，干燥，称取质量，计算产率。
（2）吸附洗脱法。在500mL烧杯中，将银杏浸膏粗提物加水稀释到300 mL，加入5 mL 絮凝剂[3]，搅拌均匀，产生大量絮状沉淀，离心过滤，留取澄清液。用2%NaOH溶液调节至pH为8.5～9，又产生絮状沉淀，离心过滤。滤液用2%HCl溶液调节pH为6～7，留取澄清液[4]。取D101树脂和聚酰胺树脂以体积比l∶1相混合，混匀装柱，总体积为100mL。将经絮凝、pH处理的澄清液约300 mL进行柱色谱。树脂的吸附量为3.0g/100 mL。然后用400 mL的去离子水洗，200mL的20%乙醇洗，最后以70%乙醇解吸。合并上述洗脱液，将其在旋转蒸发器中进行浓缩，再经干燥后，可得精制品黄酮提取物，称取质量，计算产率。
思考题
1．为什么银杏叶要干燥并经粉碎？
2．如何提高索氏提取器的萃取效率？你有什么好的建议或想法？
3．本实验中，有多少废渣或废水排出？你有什么治理方案？
注 解
[1]超临界流体是优良的萃取剂。已广泛用于药物、食品（天然香料、调味品）、化妆品、 蛋白质等的提取。超临界流体CO2可用于萃取黄酮类物质。
[2]每次用60mL二氯甲烷萃取，前后萃取3次，总共用180 mL二氯甲烷。
[3]絮凝剂系合成高分子，如 聚丙烯酰胺等。
[4]调节pH主要是沉降原花色素，因为后者有一定的毒性，必须除去。原花色素与黄酮苷的紫外吸收波长相近，易干扰黄酮含量的进一步测定。
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