血液样本是ELISA中最常见的生物液体样本,其中在检测上有全血、血清、血浆、血凝块和血细胞的区分,ELISA常用血清和血浆
血液是一种流体组织,在心血管系统内循环流动,起着运输物质的作用。血液组织是结缔组织的一种,由血浆和血细胞组成。
血浆内含血浆蛋白(白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原)、脂蛋白等各种营养成分以及无机盐、氧、激素、酶、抗体和细胞代谢产物等。血细胞有红细胞、白细胞和血小板。
哺乳类的血液具有凝血机制,血管破裂时,血小板会结集,堵塞血管破口,此时血浆中原本可水溶的血纤维蛋白等凝固成为血块,剩余的透明液体就叫做血清。
从采集样本来说,直接抽取采集的为全血,呈红色。静置后1-2h,会发生凝血反应,形成血清(呈黄色透明液体)和血凝块。在收集管中提前加入抗凝剂,混匀后离心,即可分离出血浆。
血清和血浆样本的主要区别在于血浆中抗凝剂和凝血因子的影响。
多数指标中血浆样本可以替代血清,前提是该指标不受抗凝剂成分和凝血因子的影响(如抗体类项目),但生化指标则不可用EDTA抗凝分离血浆,因为EDTA-K2此种抗凝剂不仅可以络合重金属Mg2+,也会致使K+的含量上升,故生化指标的最佳样本是血清。一般全血能收集到30-50%左右的血清/血浆。
血红蛋白类指标需采用溶血剂破碎血细胞后来进行测定,凝血因子类指标需使用血浆,其他部分指标血清血浆中有较大差异,血清血浆样本类型的选取,建议多参考国内外文献,选择合适的样本类型。
| 常见的采血管
真空采血管是采血材料中装血液标本的试管,管内有真空压力,在护士采血操作穿刺达到血管后,把穿刺针另一端插入试管,血管内的血液通过管内真空压力自然把血管内的血液往试管内排出,当达到一定采血量后管内的压力自然减小,不会继续出血。需要护士采血操作时使用,如果是事先把试管盖打开,管内的压力就会改变,不是成负压状态就没有真空压力的作用。
除红头管无添加外,其他采血管中均含有添加剂,需采血后颠倒混匀5/8次。血清管凝集后离心分离出血清,血浆管需要混匀后离心分离出血浆。用于ELISA测试的样本建议于 4℃保存24h 内完成离心分离,避免长时间存放/冻融引起血细胞破碎,发生溶血反应影响ELISA实验。
动物采血管少量采血,建议采用无菌无毒素的离心管收集,自然凝集后离心分离血清;或抗凝离心管(肝素/EDTA分离血浆),轻轻颠倒混匀后离心分离血浆。
| 剪尾取血法
将清醒鼠装入深颜色的布袋中,将鼠身裹紧,露出尾巴,用酒精涂擦或用温水浸泡使血管扩张,剪断尾尖后,尾静脉血即可流出,用手轻轻地从尾根部向尾尖挤捏,可取到一定量的血液。取血后,用棉球压迫止血。也可采用交替切割尾静脉方法取血。用一锋利刀片在尾尖部切破一段尾静脉,静脉血即可流出,每次可取0.3~0.5 ml,供一般血常规实验。三根尾静脉可替换切割,由尾尖向根部切割。由于鼠血易凝,需要全血时,应事先将抗凝剂置于采血管中,如用血细胞混悬液,则立即与生理盐水混合。
| 眼球后静脉丛取血法
左手持鼠,拇指与中指抓住颈部皮肤,食指按压头部向下,阻滞静脉回流,使眼球后静脉丛充血,眼球外突。右手持1%肝素溶液浸泡过的自制吸血器,从内呲部刺入,沿内下眼眶壁,向眼球后推进4~5 mm,旋转吸血针头,切开静脉丛,血液自动进入吸血针筒,轻轻抽吸血管(防止负压压迫静脉丛使抽血更困难),拔出吸血针,放松手压力,出血可自然停止。也可用特制的玻璃取血管(管长7~10 cm,前端拉成毛细管,内径0.1~1.5 mm,长为1 cm,后端管径为0.6 cm)。必要时可在同一穿刺孔重复取血。此法也适用豚鼠和家兔。
| 眼眶取血法
左手持鼠,拇指与食指捏紧头颈部皮肤,使鼠眼球突出,右手持弯镊或止血钳,钳夹一侧眼球部,将眼球摘出,鼠倒置,头部向下,此时眼眶很快流血,将血滴入预先加有抗凝剂的玻璃管内,直至流血停止。此法由于取血过程中动物未死,心脏不断跳动,一般可取鼠体重4%~5%的血液量,是一种较好的取血方法,但只适用一次性取血。
| 心脏取血
动物仰卧固定于鼠板上,用剪刀将心前区毛剪去,用碘酒、酒精消毒此处皮肤,在左侧第3~4肋间用左手食指摸到心搏,右手持连有4~5号针头的注射器,选择心搏最强处穿刺,当针头正确刺入心脏时,鼠血由于心脏跳动的力量,血自然进入注射器。
| 断头取血
实验者带上棉手套,用左手抓紧鼠颈部位,右手持剪刀,从鼠颈部剪掉鼠头迅速将鼠颈端向下,对准备有抗凝剂的试管,收集从颈部流出的血液,小鼠可取血0.8~1.2 ml,大鼠可取血5~10 ml。
| 颈动静脉、股动静脉取血
麻醉动物背位固定,一侧颈部或腹股沟部去毛,切开皮肤,分离出静脉或动脉,注射针沿动静脉走向刺入血管。20 g小鼠可抽血0.6 ml,300 g大鼠可抽血8 ml。也可把颈静脉或颈动脉用镊子挑起剪断,用试管取血或注射器抽血,股静脉连续多次取血时,穿刺部位应尽量靠近股静脉远心端。
| ELISA操作前必读 / 下载
聚圣源起名成语的男孩姓名大全法宣在线学习网站起名常用字大全笔画校庆祝福语甜言蜜语的意思餐饮网李姓男孩起名的四字词语关爱女孩重生之第二帝国北原美夏情人节动态图片帮男宝宝起乳名sn是什么意思啊姓方男起名大全健康管理店名怎么起瑞字男孩起名字啊cmi8738声卡驱动五行属水 起名字瓜子二手车直卖网二手车市场中央五套在线直播蔬菜公司昵称起名大全什么时候开学2021出生的女孩起什么名字好相位是什么加来道雄莽荒纪动画武汉车队佳偶天成的意思nicholasnegroponte潘氏起名女儿名字淀粉肠小王子日销售额涨超10倍罗斯否认插足凯特王妃婚姻让美丽中国“从细节出发”清明节放假3天调休1天男孩疑遭霸凌 家长讨说法被踢出群国产伟哥去年销售近13亿网友建议重庆地铁不准乘客携带菜筐雅江山火三名扑火人员牺牲系谣言代拍被何赛飞拿着魔杖追着打月嫂回应掌掴婴儿是在赶虫子山西高速一大巴发生事故 已致13死高中生被打伤下体休学 邯郸通报李梦为奥运任务婉拒WNBA邀请19岁小伙救下5人后溺亡 多方发声王树国3次鞠躬告别西交大师生单亲妈妈陷入热恋 14岁儿子报警315晚会后胖东来又人满为患了倪萍分享减重40斤方法王楚钦登顶三项第一今日春分两大学生合买彩票中奖一人不认账张家界的山上“长”满了韩国人?周杰伦一审败诉网易房客欠租失踪 房东直发愁男子持台球杆殴打2名女店员被抓男子被猫抓伤后确诊“猫抓病”“重生之我在北大当嫡校长”槽头肉企业被曝光前生意红火男孩8年未见母亲被告知被遗忘恒大被罚41.75亿到底怎么缴网友洛杉矶偶遇贾玲杨倩无缘巴黎奥运张立群任西安交通大学校长黑马情侣提车了西双版纳热带植物园回应蜉蝣大爆发妈妈回应孩子在校撞护栏坠楼考生莫言也上北大硕士复试名单了韩国首次吊销离岗医生执照奥巴马现身唐宁街 黑色着装引猜测沈阳一轿车冲入人行道致3死2伤阿根廷将发行1万与2万面值的纸币外国人感慨凌晨的中国很安全男子被流浪猫绊倒 投喂者赔24万手机成瘾是影响睡眠质量重要因素春分“立蛋”成功率更高?胖东来员工每周单休无小长假“开封王婆”爆火:促成四五十对专家建议不必谈骨泥色变浙江一高校内汽车冲撞行人 多人受伤许家印被限制高消费