一种EGCG类脂质体凝胶的制备方法及EGCG类脂质体凝胶与流程

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种egcg类脂质体凝胶的制备方法及egcg类脂质体凝胶。

背景技术：

egcg是茶叶中茶多酚的主要成分，具有良好的抗氧化性、抗肿瘤等功效，因而常被用于化妆品、医药以及食品等领域。但由于egcg易受ph、温度等因素的影响，表现出较差稳定性。同时由于egcg较强的亲水能力，导致其生物利用率低。因此选择合适的载体包覆egcg，可以提高egcg的稳定性，同时拓宽egcg的应用范围。目前，大量具有双分子层结构的载体已被用于egcg的包覆，如醇质体、脂质体、类脂质体等。

其中，类脂质体主要由非离子表面活性剂构成，相较于主要由磷脂构成的脂质体，类脂质体的成本更低，氧化稳定性更好，但是，这类脂质体类型的载体由于具有双分子层结构，膜流动性较大，容易引起药物的泄露，如何制提供一种稳定、保留率高、并能够取得良好egcg缓释效果的制备方法，是本领域有待解决的技术问题。

技术实现要素：

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有egcg类脂质体凝胶存在的技术缺陷，提出了本发明。

因此，作为本发明其中一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供一种egcg类脂质体凝胶的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：一种egcg类脂质体凝胶的制备方法其包括，

将吐温60、胆固醇和乙醇水浴溶解，加入egcg水浴溶解得到混合液；

将所述混合液缓慢注入水化介质，水浴条件下高速分散，旋蒸除去乙醇，得到egcg类脂质体悬液；

称取pva、ha、所述egcg类脂质体悬液，加入水化介质，混合，搅拌，冷冻解冻循环3次，得egcg类脂质体凝胶。

作为本发明所述的egcg类脂质体凝胶的制备方法的一种优选方案：按质量份数计，所述egcg类脂质体悬液中，所述吐温60含量为1.5～2份、所述胆固醇含量为为0.23～0.27份、所述egcg含量为0.1～0.3份、所述乙醇含量为0.006～0.01份、所述水化介质含量为0.2份。

作为本发明所述的egcg类脂质体凝胶的制备方法的一种优选方案：按质量份数计，所述egcg类脂质体悬液中，所述吐温60含量为1.7份、所述胆固醇含量为为0.25份、所述egcg含量为0.2份、所述乙醇含量为0.008份、所述水化介质含量为0.2份。

作为本发明所述的egcg类脂质体凝胶的制备方法的一种优选方案：所述称取pva、ha、egcg类脂质体悬液，加入水化介质，其中，按质量份数计，所述ha含量为0.2份，所述pva含量为1.2份，所述egcg类脂质体悬液含量为5～15份，所述水化介质含量为5～15份。

作为本发明所述的egcg类脂质体凝胶的制备方法的一种优选方案：所述egcg类脂质体悬液含量为5份、所述水化介质含量为15份。

作为本发明所述的egcg类脂质体凝胶的制备方法的一种优选方案：所述水化介质为去离子水。

作为本发明所述的egcg类脂质体凝胶的制备方法的一种优选方案：所述加入egcg水浴溶解得到混合液，其水浴温度为60℃；所述水浴条件下高速分散，旋蒸除去乙醇，其水浴温度为50℃，旋蒸温度为50℃，高速分散转速为12000r/min，高速分散时间为1min。

作为本发明所述的egcg类脂质体凝胶的制备方法的一种优选方案：所述冷冻解冻，其冷冻温度为-20℃，冷冻时间为10h，解冻温度为25℃，解冻时间为2h。

作为本发明所述的egcg类脂质体凝胶的制备方法的一种优选方案：所述加入水化介质，混合，搅拌，搅拌速率为600r/min，所述搅拌时间为6h。

作为本发明其的另一个方面，本发明克服现有技术中存在的不足，提供所述的制备方法制得的egcg类脂质体凝胶。

为解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案：所述的制备方法制得的egcg类脂质体凝胶，其中：所述egcg类脂质体凝胶，放置30天后egcg的保留率达到98.1％。

本发明的有益效果：本发明通过乙醇注入-高速分散制备了egcg类脂质体，缩短水化时间。选择对人体无毒、无副作用、具有良好的生物相容性，经过优选的pva和ha为水凝胶的原料，采用冷冻解冻物理交联的方法制备egcg类脂质体凝胶，防止引入化学交联剂，显著提高了egcg保留率，制得产品稳定，温和绿色，且具有良好的缓释效果，在化妆品的活性物缓释及生物医药中药物控释方面具有潜在的应用价值。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：

图1为pva/ha/egcg类脂质体的扫描电镜图(pva、ha、egcg类脂质体悬液占凝胶的质量百分数分别为3％、0.5％、25％)。

图2为不同egcg类脂质体含量的冷冻解冻凝胶释放特性图。

图3为不同ha含量的egcg类脂质体凝胶释放特性图。

图4为不同pva含量的egcg类脂质体凝胶释放特性图。

图5为季铵盐壳聚糖修饰的egcg类脂质体稳定性图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。

在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。

实施例1：

egcg类脂质体的制备：

称取170mg吐温60和25mg胆固醇各4份，分别加入10ml离心管中，各加入1ml乙醇，在60℃水浴条件下溶解，分别再加入20mgegcg粉末漩涡充分溶解，于60℃水浴条件下溶解后得到混合液。使用2.5ml注射器分别将4组混合液缓慢注入20ml去离子水、ph5.7pbs、ph6.8pbs、ph7.4pbs的水化介质中，使用高速分散机以12000r/min，50℃水浴条件下高速分散1min，50℃旋蒸去除乙醇。

采用透析法测定其包封率；分别在0d、30d时采用曲拉通tx-100和样品1:1混合破乳后，用水稀释，通过hplc测定egcg含量，并计算保留率。

结果表明以去离子水为水化介质制备的egcg类脂质体粒径最小为61.4nm，包封率最高为79.4％，一个月后egcg类脂质体中egcg保留率为80.7％。

实施例2：

按表1分别称取3份不同比例的pva/ha/egcg类脂质体混合液(其中egcg类脂质体为由实施例1制得)，以600r/min的速度常温搅拌6h，制得pva/ha/egcg类脂质体混合溶液。将pva/ha/egcg类脂质体混合溶液放入-20℃的冰箱中，冷冻10h，再25℃解冻2h，以此为1个循环，共循环3次即制得不同egcg载量的pva/ha/egcg类脂质体凝胶。按表1分别称取3份不同比例的pva/ha/egcg混合液，依照上述步骤，制得pva/ha/egcg凝胶。

表1：不同egcg类脂质体含量的凝胶的配方

注：egcg类脂质体悬液的缩写为en、egcg水溶液的缩写为es，且en和es中egcg的浓度是1mg/ml。

将一定质量的上述6种凝胶分别置于25ml烧杯中，各加入5ml体积比为1：4的乙醇/pbs溶液(ph5.5，20mm)混合液，分别在放置1、3、5、7、9、13、24h后测定egcg的含量，再向烧杯中补加5ml新鲜的混合液。

图1为2号pva/ha/egcg类脂质体凝胶的sem图，凝胶中明显有100nm以内的粒子存在，说明egcg类脂质体被成功载入凝胶中。如图2所示，当凝胶中所含等量的egcg时，pva/ha/egcg类脂质体凝胶常温下的缓释效果更好。

序号1所得的egcg类脂质体凝胶缓释效果最好，因此测定以序号1的配方制得的pva/ha/egcg类脂质体凝胶和pva/ha/egcg凝胶的保留率。分别在0天、30天时取少量该凝胶溶于dmso中，离心后取上清液，用40％甲醇水溶液稀释，用hplc测定egcg含量，计算其保留率。按序号1配方制得的pva/ha/egcg类脂质体凝胶的保留率为98.1％。

实施例3：

按表2分别称取4份不同比例的pva/ha/egcg类脂质体混合液(其中egcg类脂质体为由实施例1制得)，以600r/min的速度常温搅拌6h，制得pva/ha/egcg类脂质体混合溶液。将pva/ha/egcg类脂质体混合溶液放入-20℃的冰箱中，冷冻10h，再25℃解冻2h，以此为1个循环，共循环3次即制得ha占凝胶的质量分数为0、0.25％、0.5％、0.75％的pva/ha/egcg类脂质体凝胶，其中pva占凝胶的质量分数为3％，egcg类脂质体悬液占凝胶的质量分数为25％。将一定质量的凝胶置于25ml烧杯中，并向其加入5ml体积比为1：4的乙醇/pbs溶液(ph5.5，20mm)混合液，分别在放置1、3、5、7、9、13、24h后取出所有的混合溶并测定egcg的含量，同时向烧杯中补加5ml新鲜的混合液。

表2：不同ha含量的egcg类脂质体凝胶的配方(egcg类脂质体中egcg的浓度是1mg/ml)

不同ha含量的pva/ha/egcg类脂质体凝胶的释放特性如图3所示，发现当凝胶中egcg类脂质体悬液及pva的质量百分数分别为25％、3％，且添加ha的质量百分数在0.25％～0.75％时，pva/ha/egcg类脂质体凝胶缓释效果比不添加ha的pva/egcg类脂质体凝胶好。

实施例4：

分别按表2称取3份不同比例的pva/ha/egcg类脂质体混合液(其中egcg类脂质体为由实施例1制得)，以600r/min的速度常温搅拌6h，制得pva/ha/egcg类脂质体混合溶液。将pva/ha/egcg类脂质体混合溶液放入-20℃的冰箱中，冷冻10h，再25℃解冻2h，以此为1个循环，共循环3次即制得pva占凝胶百分含量为1.5％、3％、4.5％的pva/ha/egcg类脂质体凝胶，其中ha占凝胶的质量分数为0.5％，egcg类脂质体悬液占凝胶的质量分数为25％。将一定质量的凝胶置于25ml烧杯中，并向其加入5ml体积比为1：4的乙醇/pbs溶液(ph5.5，20mm)混合液，分别在放置1、3、5、7、9、13、24h后取出所有的混合溶并测定egcg的含量，同时向烧杯中补加5ml新鲜的混合液。

表3：不同pva含量的egcg类脂质体凝胶的配方(egcg类脂质体中egcg的浓度是1mg/ml)

不同pva含量的pva/ha/egcg类脂质体凝胶的释放特性如图4所示，发现当凝胶中egcg类脂质体选悬液及ha的质量百分数分别为25％、0.5％时，pva含量越高，释放越慢，可以通过控制pva含量来调控egcg的释放速率。

本发明的有益效果是通过乙醇注入-高速分散法制得的egcg类脂质体包封率高、粒径小且分布均匀。选择对人体无毒，无副作用，具有良好的生物相容性的pva和ha为水凝胶的原料，采用冷冻解冻物理交联的方法制备egcg类脂质体凝胶，防止引入化学交联剂，更温和绿色，同时pva/ha/egcg类脂质体凝胶比pva/ha/egcg凝胶具有更好的缓释效果。通过对pva、ha含量的调控可以控制egcg的释放速度。

实施例5(对照例)：

将实施例1制备好的egcg类脂质体分别按1：1的比例与季铵盐壳聚糖水溶液混合，控制最终混合液中季铵盐壳聚糖的质量分数为0.05％、0.10％、0.15％、0.20％、0.25％、0.50％、0.75％、1.00％。将混合液在50℃的条件下搅拌30min，即制得经季铵盐壳聚糖修饰的egcg类脂质体。如图显示，静置一天后发现，添加了季铵盐壳聚糖的egcg类脂质体不稳定，放置一天，底部均有白色固体析出，说明该体系不利于保护egcg类脂质体。原有可能是季铵盐壳聚糖带正电与带少量负点的egcg结合从而沉降，另一方面由于季铵盐壳聚糖水溶液ph偏碱性而egcg在酸性条件下较为稳定。

季铵盐壳聚糖修饰的egcg类脂质体稳定性图如图5(从左到右季铵盐壳聚糖的质量分数为0.05％、0.10％、0.15％、0.20％、0.25％、0.50％、0.75％、1.00％；上图是刚制备时的照片，下图是储藏1d的照片)。同时，研究发现，将本发明pva/ha凝胶替换为目前常用的卡波类凝胶，制得的egcg类脂质体凝胶十分不稳定，egcg的包封率和保留率显著下降。

综上，本发明通过乙醇注入-高速分散制备了egcg类脂质体，缩短水化时间。选择对人体无毒、无副作用、具有良好的生物相容性，经过优选的pva和ha为水凝胶的原料，采用冷冻解冻物理交联的方法制备egcg类脂质体凝胶，防止引入化学交联剂，显著提高了egcg保留率，制得产品稳定，温和绿色，且具有良好的缓释效果，在化妆品的活性物缓释及生物医药中药物控释方面具有潜在的应用价值。

应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。